| 猪伪狂犬病病毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 赵丽 崔保安 陈红英 赵玉丛 郭宏伟 |
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| 作者单位： | 1. 郑州牧业工程高等专科学校,河南,郑州,450011
2. 河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列(EF552427),设计并合成1对引物.通过常规PCR扩增猪伪狂犬病病毒gE基因,将鉴定正确的gE基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒.以该阳性重组质粒为作为模板建立SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性试验、特异性试验和重复性试验.结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.999 9,最低检测的拷贝教为35.4拷贝/25 μL,比常规PCR高10倍,特异性和重复性较好并能对样品进行定量检测等优点.本研究成功的建立了检测猪伪狂犬病病毒的SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础.
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| 关 键 词： | 猪伪狂犬病病毒 SYBR-Green Ⅰ 实时定量 PCR |
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