| λ-Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7细胞毒素stx2基因 |
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| 作者姓名： | 刘变芳 殷先华 吕欣 魏新元 郭蔼光 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学,食品科学与工程学院,陕西,杨凌,712100
2. 加拿大农业部贵尔夫食品安全研究中心,安大略 贵尔夫 N1G 5C9
3. 西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌712100 |
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| 基金项目： | 西北农林科技大学青年启动基金资助项目 |
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| 摘 要： | 采用PCR法合成了stx2基因上游和下游的2个同源臂序列分别为1635,1655bp。2个同源臂序列被克隆到载体pCR2.1-TOPO上,两臂中间插入庆大霉素抗性基因Gm(855bp),构建了stx2基因敲除盒子pCR2.1-B-Gm-A。将含2个同源臂和Gm抗性基因片段的扩增子电转化到含质粒pKM208的感受态细胞EHECO157:H7中,通过λ-Red重组系统产生了stx2基因敲除突变菌株。用Verocell试验检测了突变株的产毒能力并进行了细胞黏附试验。结果表明,合成同源臂利用λ-Red重组系统可以有效的敲除EHEC毒素基因,stx2基因敲除后的突变株不产stx2毒素,对真核细胞CaCo-2和Hep-2的黏附能力明显降低。
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| 关 键 词： | λ-Red重组系统 肠出血性大肠杆菌 stx2毒素基因 基因敲除 |
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