| 犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 易立,程世鹏,王建科,柴秀丽,罗彬,张海玲,吴威,闫喜军.犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立[J].中国兽医学报,2010,30(8). |
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| 作者姓名： | 易立 程世鹏 王建科 柴秀丽 罗彬 张海玲 吴威 闫喜军 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院,特产研究所,吉林吉林,132109 |
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| 基金项目： | 吉林省科技发展计划资助项目，吉林市科技发展资助项目 |
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| 摘 要： | 以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法.在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5'和3'端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性.以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的iVP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1:20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0.采用iVP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,iVP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系.本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.
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| 关 键 词： | 犬细小病毒 原核表达 VP2蛋白 间接ELISA |
Expression of VP2 gene of canine parvovirus virus and development of a recombinant protein-based indirect ELISA for antibodies detection |
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| YI Li,CHENG Shi-peng,WANG Jian-ke,CHAI Xiu-li,LUO Bin,ZHANG Hai-ling,WU Wei,YAN Xi-jun.Expression of VP2 gene of canine parvovirus virus and development of a recombinant protein-based indirect ELISA for antibodies detection[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(8). |
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| Authors: | YI Li CHENG Shi-peng WANG Jian-ke CHAI Xiu-li LUO Bin ZHANG Hai-ling WU Wei YAN Xi-jun |
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