藜CaMAPKK2的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选

【目的】通过对抗逆植物藜的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联途径中MAPKK的胁迫表达模式分析及信号转导途径互作组分的筛选，探索植物藜响应外界胁迫信号诱发逆境耐受的机制。【方法】以藜叶片总RNA为模板，利用定量PCR方法对NaCl、H2O2和ABA胁迫下藜MAPKK表达规律进行了分析。利用RT-PCR结合RACE技术获得了藜MAPKK的全长cDNA序列。利用酵母双杂交技术对MAPKK盐胁迫信号通路互作组分进行了分析。【结果】获得一个藜MAPKK的全长cDNA序列，命名为CaMAPKK2，其开放阅读框为1 089 bp，编码一个由362个氨基酸组成的丝裂原活化蛋白激酶。定量PCR显示CaMAPKK2受盐胁迫诱导明显上调表达，同时受外源H2O2和ABA调控。H2O2合成抑制剂DPI与ABA合成抑制剂Na2WO4显著抑制了300 mmol?L-1 NaCl处理下CaMAPKK2的表达。以全长CaMAPKK2为诱饵蛋白，利用酵母双杂交技术筛选到5个可能与CaMAPKK2相互作用的蛋白。测序结果显示，其中1个序列可通读，该cDNA序列长794 bp，与欧洲赤杨（Alnus glutinosa）和拟南芥的噻唑合成酶（thiazole biosynthetic enzyme）基因AgTHI1和AtTHI1核酸序列相似度达79%和78%，其它4个序列没有连续的读码框。【结论】CaMAPKK2受NaCl和H2O2诱导上调表达，暗示盐胁迫可能通过诱导H2O2和ABA的积累从而导致CaMAPKK2表达增加。要进一步筛选CaMAPKK2互作组分需获得更多阳性克隆并开展相关功能验证试验。

The Expression Analysis and Screening of Interaction Protein of Mitogen-Activated Protein Kinase (CaMAPKK2) in Salt-Stress Signal Pathways of Chenopodium album