| 鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用 |
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| 作者姓名： | 魏蔷 李青梅 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 |
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| 作者单位： | 1. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室;2. 河南农业大学牧医工程学院;3. 郑州大学农学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目（32002284）；;河南省科技攻关项目（232102110105）； |
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| 摘 要： | 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体，首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白，经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性，HA效价为1∶27。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，免疫4次后，小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600，间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞，结合iELISA和IFA检测，经过多轮亚克隆，最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示，单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示，单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白，表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明，单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性，中和效价分别为1∶27和1∶24。亚型鉴定表明...
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| 关 键 词： | 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心ELISA |
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