| H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化 |
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| 引用本文： | 屈小天,王雅楠,许倩茹,李雪洋,张申立,张二芹,张改平.H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化[J].河南农业科学,2024(3):125-132. |
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| 作者姓名： | 屈小天 王雅楠 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 |
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| 作者单位： | 1. 河南农业大学生命科学学院;2. 吉林大学动物医学院;3. 河南农业大学动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心;4. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08001006-10）； |
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| 摘 要： | 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性，利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA，该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子，有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中，筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗，采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示，HA基因已插入到水稻基因组中，重组HA基因大小为4 660 bp。将阳性植株移植到大田中，4个月后收获水稻种子，提取水稻胚乳蛋白，Western blot鉴定结果表明，HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化，其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗，免疫小鼠，小鼠血清具有较高的特异性抗体水平，表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上，成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统，并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白...
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| 关 键 词： | H5N1亚型禽流感病毒 HA蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化 |
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