家蚕溶茧酶基因的克隆、序列分析及原核表达

【目的】获得家蚕溶茧酶基因的全长序列，实现溶茧酶基因在大肠杆菌中的融合表达。【方法】利用cDNA末端扩增技术（RLM-RACE）克隆了家蚕溶茧酶基因cDNA序列（GenBank 登录号：EF428980）。【结果】家蚕溶茧酶基因cDNA序列全长1 047 bp，其中780 bp的蛋白质编码区可编码260个氨基酸，预测蛋白质分子量为27.6 kD，等电点（pI）为8.89。家蚕溶茧酶基因包含4个内含子。用Signal P 3.0 Server程序分析家蚕溶茧酶基因，预测其从第1～22位为信号肽序列。SMART分析结果预测其第34～254位氨基酸序列具有类胰蛋白的丝氨酸蛋白酶活性。重组质粒pET-32a-Cocoonase 转化E.coli BL21进行原核表达，SDS-PAGE分析结果表明,家蚕溶茧酶基因以融合蛋白形式表达，相对分子量为48 kD。【结论】本研究成功地克隆、表达了家蚕溶茧酶基因，分析和预测了它的结构和功能，为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

Cloning and Expression of the Cocoonase Gene from Bombyx mori