甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定 |
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引用本文: | 陈祎,张伟,赵丹,郭巍.甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定[J].北京农学院学报,2019,34(1). |
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作者姓名: | 陈祎 张伟 赵丹 郭巍 |
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作者单位: | 北京农学院植物科学技术学院,北京,102206;河北农业大学植物保护学院,河北保定,071001 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家现代花生产业体系资助 |
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摘 要: | 【目的】为了研究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的酶学性质,探索其对甜菜夜蛾幼虫发育过程的影响,为甜菜夜蛾的生物防治提供新靶标。【方法】以pMD19-T-Secda2a重组质粒为模板,PCR扩增得到Secda2a基因。构建原核表达载体pET-28a-Secda2a,IPTG诱导蛋白表达。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建重组转座载体pFastBac HT A-Secda2a,脂质体转染昆虫细胞Sf9,Western blot对SeCDA2a重组蛋白进行分析,以对硝基苯胺为底物利用分光光度计测定其酶活力。【结果】Secda2a在大肠杆菌和Sf9中均成功表达61kDa的重组蛋白,与预测分子量大小相符。IPTG终浓度为0.50mmol/L、37℃诱导培养4h时蛋白表达量最高。昆虫细胞Sf9表达的重组蛋白SeCDA2a的酶活力是1.57U/mL。【结论】本研究实现甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因Secda2a的外源表达,测定重组蛋白SeCDA2a的酶活力。
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关 键 词: | 甜菜夜蛾 几丁质脱乙酰酶 外源表达 酶活测定 |
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