猪IFN-β的克隆与原核表达 |
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作者姓名: | 卜秀娟 胡仲明 柳巨雄 刘晔 时琳 扈荣良 |
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作者单位: | 1. 吉林大学军需科技学院,吉林长春,130062 2. 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春130062 3. 吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春130062 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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摘 要: | 根据已发表的AY687281基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR方法从长白猪白细胞基因组中扩增到猪β干扰素基因,将PCR产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定。序列分析表明,获得的猪β干扰素基因全长561bp,编码186个氨基酸,与GenBank中AY687281基因序列同源性达99.2%,在28、34、128位核苷酸发生了点突变,由G变为A,由C变为G,由A变为G,由C变为T,导致10、12、43位氨基酸由A变为T,L变为V,E变为G,而在177位点核苷酸的突变没有改变氨基酸。将该基因克隆到pEGX-4T-1表达载体中,转化宿主菌Rosetta,对猪β干扰素进行原核表达。重组表达菌经IPTG诱导后,得到高效表达,所表达蛋白约为43 000,占总蛋白的39.3%,表达产物主要为包涵体。纯化后的包涵体具有抗病毒的生物学活性,能抑制口蹄疫病毒(FMDV)增殖。
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关 键 词: | 猪 β干扰素 克隆 原核表达 生物活性 克隆与原核表达 porcine novel cloning Molecular 增殖 FMDV 口蹄疫 生物学活性 病毒 纯化 包涵体 总蛋白 表达蛋白 高效表达 IPTG 重组表达 β干扰素 Rosetta 宿主菌 |
文章编号: | 1005-4545(2008)05-0485-04 |
修稿时间: | 2007-05-14 |
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