一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定 |
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作者姓名: | 张敬梅 余为一 李林 张春玲 |
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作者单位: | 安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,安徽合肥,230036;安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,安徽合肥,230036;安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,安徽合肥,230036;安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,安徽合肥,230036 |
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摘 要: | [目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His—PoIFN一γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST—PoIFN一1作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行问接ELISA和Westernblot检测。[结果]试验获得l株能稳定分泌抗猪IFN一1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Westernblot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His—PoIFN一γ和GST—PoIFN一γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1:160000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。
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关 键 词: | 猪γ-干扰素 融合蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定 |
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