蓝舌病病毒NS4重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 马骥,李芳,林俊泓,刁洋娟,易华山,胡庭俊.蓝舌病病毒NS4重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备[J].云南畜牧兽医,2022(5):12-15. |
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作者姓名: | 马骥 李芳 林俊泓 刁洋娟 易华山 胡庭俊 |
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作者单位: | 1. 广西大学动物科学技术学院;2. 重庆市大足区动物疫病预防控制中心;3. 重庆纳比微特检测技术服务有限公司;4. 西南大学动物医学院 |
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基金项目: | 重庆市基础研究与前沿探索专项项目基金(cstc2018jcyjAX0615); |
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摘 要: | 蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)非结构蛋白4(Non-structural protein 4,NS4)拮抗宿主天然免疫。为研究BTV NS4蛋白的功能及基于BTV NS4的检测方法,本研究采用pET-32a-NS4在37℃,0.8 mmol/L IPTG,诱导6 h,超声破碎裂解菌体后纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。经Ni柱亲和纯化后获得大小约27 kD的蛋白,获得的NS4抗体效价在1∶512 000以上;纯化后的抗体浓度为1.0 mg/mL,体积为12 mL,抗体纯度大于85%,纯化抗体得率达到8.0 mg以上;Western blot分析可知纯化NS4蛋白多克隆抗体与pET-32a-NS4重组蛋白能产生特异性反应。本研究对BTV NS4重组蛋白进行表达纯化,并成功制备BTV NS4多克隆抗体,为BTV NS4的功能研究及临床应用奠定了基础。
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关 键 词: | 蓝舌病病毒 NS4蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
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