| 梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测 |
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| 引用本文： | 牛建新,周民生,马兵钢,赵英,刘宏. 梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测[J]. 园艺学报, 2007, 34(1): 53-57 |
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| 作者姓名： | 牛建新 周民生 马兵钢 赵英 刘宏 |
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| 作者单位： | (石河子大学农学院园艺系, 新疆石河子832003; 新疆兵团绿洲生态农业重点实验室, 新疆石河子832003) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;教育部科学技术研究重点项目;国家科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术, 用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料, 利用D IG标记, 研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响, 退火温度、Taq DNA聚合酶、Mg2+ 、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明: RNasin的用量大于0.2 U·μL-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强; 只有当dNTPs浓度达1.0 mmol·L-1时才能生成一定量的cDNA;AMV浓度在0.3～0.5 U·μL-1均可进行正常的逆转录, 而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多; 引物浓度达到0.9μmol·L-1以上时才能进行有效的逆转录, 并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20～30次可出现较强的蓝色信号, 引物浓度在0.8～1.2μmol·L-1时显色较好; Taq酶浓度为20 U·mL-1以上, 均显示较深的蓝色; Mg2 +浓度为1.5mmol·L-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系, 利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证, 取得了很好效果。
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| 关 键 词： | 梨 库尔勒香梨 苹果褪绿叶斑病毒 原位PCR |
| 文章编号： | 0513-353X（2007）01-0053-06 |
| 收稿时间： | 2006-09-11 |
| 修稿时间： | 2006-09-112006-11-27 |
Detection of Apple chlorotic leaf spot virus in Pear by in situ RT-PCR |
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| NIU Jian-xin,ZHOU Min-sheng,MA Bing-gang,ZHAO Ying,LIU Hong. Detection of Apple chlorotic leaf spot virus in Pear by in situ RT-PCR[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2007, 34(1): 53-57 |
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| Authors: | NIU Jian-xin ZHOU Min-sheng MA Bing-gang ZHAO Ying LIU Hong |
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| Affiliation: | Institute of Hematology, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China. E-mail：
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pear Korla pear Apple chlorotic leaf spot virus In situ PCR |
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