鸡毒支原体p24蛋白的原核表达及膜定位研究

为研究p24蛋白在鸡毒支原体中的定位，对p24基因序列进行分析，PCR扩增p24基因并构建原核表达载体，表达p24蛋白，制备多克隆兔抗血清，ELISA测定其效价，提取鸡毒支原体总蛋白、膜蛋白、胞浆蛋白通过Western blot进行亚细胞定位。结果显示：p24基因高度保守，全长576 bp,编码192个氨基酸；成功构建表达载体pCold-p24,经转化、诱导表达后获得重组蛋白rp24,大小约为35 kDa; ELISA检测兔抗rp24血清效价为1∶12 800,说明rp24蛋白具有很好的免疫原性；Western blot显示rp24蛋白在膜蛋白免疫印迹条带较亮，在胞浆蛋白中条带弱，证明p24主要分布在膜表面，是鸡毒支原体的膜蛋白。试验结果为后续基因工程疫苗研制、诊断试剂盒研发、致病机理研究奠定基础。