猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达与鉴定

为了表达猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3) Cap蛋白，按照昆虫细胞密码子偏嗜性对ORF2基因进行优化并在N端加上His标签基因，合成的ORF2基因片段克隆入pFastBac Dual杆状病毒穿梭载体；将重组质粒转化大肠杆菌DH10-Bac感受态后通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-C2;将重组杆粒转染至SF9细胞5 d后收集细胞上清液；连续传代3次观察细胞病变。将接毒后的SF9细胞样通过Western blot及间接免疫荧光(IFA)进行Cap蛋白表达的鉴定。利用蔗糖密度梯度离心对病毒样颗粒的Cap蛋白纯化后进行透射电镜观察。结果显示：SDS-PAGE和Western blot检测发现重组杆状病毒在昆虫细胞中能够有效表达Cap蛋白，且与His-tag单抗及PCV3阳性血清发生特异性反应；IFA进一步鉴定感染了重组病毒的昆虫细胞与His单抗产生特异性荧光；透射电镜可以明显观察到14～17 nm左右形态规则的病毒样颗粒(VLPs)。PCV3 Cap蛋白的成功表达和鉴定将为研究Cap蛋白的免疫原性和空间结构奠定基础，也为探讨开发PCV3的亚单...