应用非洲猪瘟病毒基因质粒标准物质评价荧光PCR试剂盒及核酸提取方法 |
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作者姓名: | 图门巴雅尔 王治维 张梦鸽 王锦 赵凯 张昱 胡明明 刘畅 雷宇平 王仲兵 |
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作者单位: | 1. 山西省动物疫病预防控制中心;2. 运城市畜牧兽医发展中心;3. 安徽科技学院动物科学学院/农业农村部猪肉质量安全控制重点实验室/动物营养调控与健康安徽省重点实验室 |
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基金项目: | 山西省重点研发计划项目(201903D221002);;安徽省高校优秀青年人才支持计划一般项目(gxy2021119); |
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摘 要: | 为评价不同检测试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的检测性能,以及不同提取方法对ASFV核酸的提取效率,本研究以国家标准物质“ASFV B646L基因质粒标准物质”作为模拟样品,通过荧光定量PCR检测,比较扩增曲线、Ct值等指标,分析了4个厂家的5种试剂盒的敏感性、重复性及反应耗时等检测性能,同时比较了磁珠法与柱式法等2种核酸提取方法的提取效率。结果显示:5种试剂盒均能有效检测出不同浓度的ASFV B646L基因质粒标准物质,不同的试剂盒最低检测限不同,最低的试剂盒为5.8×10-1 copies/μL,线性关系最优的试剂盒R~2=0.997,各试剂盒实际反应时间与理论时间均有差异。2种提取方法均可有效提取ASFV B646L基因质粒标准物质,其中柱式法的提取效率高于磁珠法,但柱式法的离散度大于磁珠法。综上,4个厂家的5种试剂盒及柱式法与磁珠法均可使用ASFV B646L标准物质作为基准进行试剂盒性能及提取效率评价。在实际检测中,应根据具体情况选择合适的检测试剂盒及核酸提取方法。
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关 键 词: | 非洲猪瘟病毒 标准物质 核酸提取 荧光定量PCR |
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