猪源化抗PEDV单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达 |
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引用本文: | 刘慧敏,常琛,尹志安,朱文姣,周国丽,杨国庆.猪源化抗PEDV单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达[J].中国兽医学报,2018(8). |
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作者姓名: | 刘慧敏 常琛 尹志安 朱文姣 周国丽 杨国庆 |
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作者单位: | 河南农业大学生命科学学院 |
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摘 要: | 通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)猪源化单链抗体scFv-Fc。提取抗PEDV杂交瘤细胞2D1的总RNA,通过反转录与SOE-PCR方法获得单链抗体scFv基因,同时提取猪脾脏组织的总RNA,RT-PCR获得猪免疫球蛋白恒定区Fc基因。通过SOE-PCR方法将scFv与Fc连接获得猪源性单链抗体scFv-Fc融合基因,构建重组质粒pET-28a-scFv-Fc,将该重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析及Western blot检测融合蛋白的特异性,再对表达蛋白进行纯化和复性,通过间接ELISA鉴定融合蛋白与PEDV的结合活性。结果显示,插入pET-28a载体的scFv-Fc序列长度1 128bp,抗PEDV猪源化单链抗体的相对分子质量为45 800,重组蛋白具有较高的特异性。本研究成功构建了pET-28a-scFv-Fc原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为PEDV重组抗体的研究奠定理论基础。
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