棘阿米巴原虫actin1基因原核表达载体构建与鉴定 |
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引用本文: | 李垚艳,梁宸,杨春梅,王双露,李金旺,冯宪敏.棘阿米巴原虫actin1基因原核表达载体构建与鉴定[J].中国兽医学报,2018(9). |
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作者姓名: | 李垚艳 梁宸 杨春梅 王双露 李金旺 冯宪敏 |
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作者单位: | 吉林医药学院病原生物学教研室 |
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摘 要: | 棘阿米巴角膜炎的临床诊断比较困难,以角膜刮片的病原学诊断为主,样本采集困难,临床诊断率低。本研究构建了棘阿米巴原虫actin1基因进行原核表达载体,并进行鉴定。以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,通过特异性引物,经聚合酶链反应,获得actin1基因开放阅读框(ORF)片段,进行克隆及序列分析,经双酶切,连接,构建重组表达载体pET22b(+)-actin1。将重组载体转化入大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选出阳性菌落,经PCR扩增和酶切鉴定后,阳性质粒送样测序;提取阳性质粒,转化入E.coli BL21(DE+),1mol/L IPTG诱导重组蛋白r-actin1的表达。自棘阿米巴滋养体cDNA扩增得到约774bp的actin1基因片段;经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体pET22b(+)-actin1构建成功;重组菌株BL21(DE+)/pET22b(+)-actin1,经培养、诱导、SDS-PAGE电泳,出现1条相对分子质量约为30 000重组蛋白条带,r-actin1表达诱导表达成功。成功构建重组表达载体pET22b(+)-actin1,并诱导表达。
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