| 斯氏艾美耳球虫ASP基因的克隆表达与免疫特性分析 |
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| 引用本文： | 宋鸿雁,景瑾,董蓉莲,仇保丰,蒋荧梅,朱顺星,王生存,邵义祥. 斯氏艾美耳球虫ASP基因的克隆表达与免疫特性分析[J]. 中国兽医学报, 2018, 0(4): 676-681 |
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| 作者姓名： | 宋鸿雁 景瑾 董蓉莲 仇保丰 蒋荧梅 朱顺星 王生存 邵义祥 |
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| 作者单位： | 南通大学实验动物中心;江苏省疾病预防控制中心;南通出入境检验检疫局 |
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| 摘 要： | 根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种天冬氨酸蛋白酶(ASP)蛋白序列设计引物,通过cDNA末端快速扩增法(RACE)获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)ASP的全基因序列,将其连入原核表达载体pET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)pLysS,通过IPTG诱导表达重组ASP蛋白,并进行Western blot分析。结果显示,ASP序列全长为1 568bp,最大ORF为1 407bp。Western blot分析发现,ASP在诱导后37℃培养4h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下有表达,且有少量可溶性表达;证实重组ASP蛋白确实对E.stiedai有免疫原性。结果表明,试验成功获得E.stiedai ASP的全基因序列以及重组ASP蛋白。
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| 关 键 词： | E.stiedai ASP cDNA末端快速扩增法 克隆 原核表达 重组蛋白 |
Cloning and characterization of aspartyl protease(ASP) from Eimeria stiedai |
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