| 猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建 |
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| 引用本文： | 魏国燕,李坤,卢曾军,刘在新,孙普,白兴文,李冬,陈应理,包慧芳,李平花,付元芳,张婧,马雪青,曹轶梅.猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建[J].中国兽医学报,2018(1):177-182. |
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| 作者姓名： | 魏国燕 李坤 卢曾军 刘在新 孙普 白兴文 李冬 陈应理 包慧芳 李平花 付元芳 张婧 马雪青 曹轶梅 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室; |
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| 摘 要： | 为构建猪C型凝集素受体8A(C-type lectin domain family 8,member A,CLEC8A)的单域抗体酵母展示文库,本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析,鉴定出该受体胞外区基因序列,并插入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼,间接ELISA监测抗体滴度,于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA,反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼VHH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞(EBY100),经细胞内同源重组,成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明,文库大小约为1.6×107,文库重组率达90%,文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体,为后续文库筛选奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪CLEC8A基因 骆驼单域抗体 酵母展示文库 流式细胞术 |
Construction of yeast surface display library for single domain antibody against porcine C-type lectin domain family 8,member A receptor |
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