口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法的建立

本研究依据已发表的FMDV保守基因区域RNA设计特异性引物,扩增目的RNA的6个区域,通过体系优化试验、敏感性试验和特异性试验建立了通用型口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法。试验结果为:体系优化试验确定最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为60 min,最佳内、外引物比为1:12;应用本方法只能扩增出口蹄疫病毒,不能扩增出其他相关疫病病原;经测定试验所用FMDV核酸初始浓度为20.082μg/L,本方法可检出的最低浓度为在此基础上稀释2~(-3)×10~(-6)倍;应用所建立的方法检测相关疫苗样品,只有4种亚型口蹄疫疫苗有扩增曲线,其他样品均未扩增出任何曲线。