| 1α羟化酶的真核表达和生物信息学特征及其在成年肉鸡组织中的差异表达 |
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| 引用本文： | 尚书凤,赵小龙,杨书洋,郭素芬,樊阔,李天,王琦.1α羟化酶的真核表达和生物信息学特征及其在成年肉鸡组织中的差异表达[J].江苏农业学报,2022(5):1286-1297. |
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| 作者姓名： | 尚书凤 赵小龙 杨书洋 郭素芬 樊阔 李天 王琦 |
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| 作者单位： | 1. 陕西理工大学生物科学与工程学院;2. 汉中市中心医院 |
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| 基金项目： | 陕西省教育厅专项科研计划项目(16JK1148)； |
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| 摘 要： | 旨在构建1羟化酶(CYP27C1)真核表达载体，在293T细胞中重组表达CYP27C1-mycHis,探究cyp27c1基因在成年鸡不同组织中的表达水平，明确1α-羟化酶三级结构特征、与底物识别和活性中心底物结合相关的关键氨基酸。将合成的cyp27c1的开放阅读框(ORF)插入pMD18-T质粒，并将该质粒命名为pMD-cyp27c1。以改造后的质粒为模板，通过PCR扩增cyp27c1 ORF,将其插入pcDNATM3.1,构建真核表达载体pcDNA-cyp27c1。然后分别用pcDNA-cyp27c1及空载体pcDNA瞬时转染293T细胞，48 h后收集细胞，提取线粒体，用Bradford法测定蛋白质的质量浓度。1μg线粒体用于12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，以myc抗体作为一抗检测重组CYP27C1在293T细胞中的表达水平。利用实时荧光定量PCR检测cyp27c1在成年鸡组织中的表达水平。通过生物信息学分析CYP27C1的理化特性，并预测其亚细胞定位，利用同源建模、多序列同源比对和分子对接法研究CYP27C1的空间结构特征以及与底物(25-...
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| 关 键 词： | 鸡 细胞色素P450 27C1 真核表达 生物信息学 |
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