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溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价
引用本文:张燕飞,庞欢瑛,简纪常,鲁义善,汤菊芬,吴灶和. 溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价[J]. 水产学报, 2015, 39(10): 1558-1568
作者姓名:张燕飞  庞欢瑛  简纪常  鲁义善  汤菊芬  吴灶和
作者单位:广东海洋大学 水产学院,广东海洋大学 水产学院,广东海洋大学 水产学院,广东海洋大学 水产学院,广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室
基金项目:广东省海洋经济创新发展区域示范专项项目(GD2012-B01-004); 国家科技支撑项项目(2012BAD17B02、2012BAD17B03); 广东高校国际合作创新平台项目(2013gjhz0008);
摘    要:为了研究溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗对鱼体的免疫保护作用,本研究采用Overlap PCR和同源重组技术,构建了kdpD/kdpE(kdpDE)基因无标记基因框内敲除突变株。对野生株和缺失突变株的生物学特性及致病性进行了比较研究,发现kdpDE的缺失对溶藻弧菌的生长速率和胞外蛋白酶活性的影响不明显,但是突变株的泳动能力、生物被膜形成能力较野生株下降。斑马鱼致病性实验结果显示,突变株毒力下降78.5倍,表明减毒株构建成功,可以作为减毒活疫苗的候选菌株。突变株在鱼体内存活能力实验结果显示,注射免疫7 d后,鱼体内不能检测到该菌。以突变株ΔkdpDE为抗原,分别用注射和浸泡的方式免疫斑马鱼,免疫后第28天用溶藻弧菌和哈维氏弧菌攻毒,评估该减毒活疫苗及不同免疫方式对斑马鱼的保护效果。实验结果表明,免疫后的斑马鱼能够抵抗溶藻弧菌的感染,其中注射免疫组的免疫保护率达83.3%,浸泡免疫组次之(66.7%);同时,该减毒活疫苗能刺激斑马鱼对哈维氏弧菌产生交叉保护效应,其中注射免疫组的免疫保护率为65.5%,浸泡免疫组为55.2%。以上结果表明,kdpDE基因敲除突变株可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的候选减毒活疫苗。

关 键 词:溶藻弧菌  KdpDE  减毒活疫苗  免疫保护率
收稿时间:2015-01-26
修稿时间:2015-07-10

Construction of an attenuated two-component regulatory system KdpDE strain of Vibrio alginolyticus and evaluation of its immunogenic and protective effects as a vaccine
ZHANG Yanfei,PANG Huanying,JIAN Jichang,LU Yishan,TANG Jufen and WU Zaohe. Construction of an attenuated two-component regulatory system KdpDE strain of Vibrio alginolyticus and evaluation of its immunogenic and protective effects as a vaccine[J]. Journal of Fisheries of China, 2015, 39(10): 1558-1568
Authors:ZHANG Yanfei  PANG Huanying  JIAN Jichang  LU Yishan  TANG Jufen  WU Zaohe
Affiliation:Fisheries College,Guangdong Ocean University,Fisheries College,Guangdong Ocean University,Fisheries College,Guangdong Ocean University,Fisheries College,Guangdong Ocean University,Guangdong Provincial key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals
Abstract:
Keywords:Vibrio alginolyticus   KdpDE   live attenuated vaccine   relative percent survival
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