| 鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 韩凯凯,严若峰,刘青涛,刘宇卓,李银,赵冬敏,黄欣梅,杨婧.鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定[J].江苏农业科学,2021,49(15):147-150. |
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| 作者姓名： | 韩凯凯 严若峰 刘青涛 刘宇卓 李银 赵冬敏 黄欣梅 杨婧 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014;江苏大学生命科学学院,江苏镇江212013;南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所,江苏南京210014 |
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| 摘 要： | 甲基转移酶(methyltransferase,MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用.为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达,并对其生物学功能进行鉴定,以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板,设计针对MTase的特异性引物,提取TMUV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板进行扩增,得到MTase的基因片段,然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中,构建重组质粒pCMV-Flag-MTase,提取去除内毒素的重组质粒,并转染至BHK-21细胞,通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达.结果显示,质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确,通过间接免疫荧光与Western Blot检测,重组质粒在BHK-21细胞内正常表达,表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性.
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| 关 键 词： | 鸭坦布苏病毒 甲基转移酶 真核表达 |
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