| 牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证 |
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| 作者姓名： | 谢建鹏 陈平 王斐 何振富 |
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| 作者单位： | 甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所，甘肃 兰州 730070 |
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| 基金项目： | 甘肃省农业科学院科研条件建设及成果转化项目(2021GAAS51)。 |
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| 摘 要： | 为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系，采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点，构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列，构建该靶基因的突变型重组质粒(pGL3-promoter-mut VEGFA)，再进行重组质粒和目的miRNA的miRNA mimic的共转染实验。结果表明，预测到的miR-200b与VEGFA基因的3′UTR区存在结合位点。PCR进行扩增和测序之后，VEGFA基因3′UTR区的野生型、突变型载体构建成功。共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组(P < 0.05)，VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异(P ＞ 0.05)。说明VEGFA基因的3′UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性，验证了VEGFA是miR-200b的靶基因。
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| 关 键 词： | 牦牛 载体构建 双荧光素酶 VEGFA基因 miR-200b |
Construction of Yak VEGFA Double Luciferase Vectors and Their Targeting against miR-200b |
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| Authors: | XIE Jianpeng CHEN Ping WANG Fei HE Zhenfu |
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| Institution: | Institute of Animal Husbandry, Pasture and Green Agriculture, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou Gansu 730070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Yak Vector construction Dual-luciferase VEGFA gene miR-200b |
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