橡胶草悬浮细胞遗传转化体系的建立

橡胶草(Taraxacum koksaghyz Rodin),也称为俄罗斯蒲公英,是菊科菊苣族蒲公英属多年生宿根型草本植物,目前被认为是一种潜在的产胶替代植物和研究橡胶生物合成的理想模式植物。为了建立橡胶草悬浮细胞的遗传转化体系,笔者测定了悬浮细胞对农杆菌抑菌剂替卡西林(Ticarcillin)以及对潮霉素(Hygromycin B)的敏感性;采用携带p CAMBIA1302的根癌农杆菌GV3101侵染悬浮细胞,用绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素来检测转化的成功率。结果表明:0~300 mg·L-1的Ticarcillin对悬浮细胞的生长和增殖没有影响,用于进行抗性愈伤筛选的潮霉素适宜质量浓度为10 mg·L-1。抗性愈伤的绿色荧光镜检(GFP检测)以及潮霉素和GFP基因的PCR检测均表明,将OD600值为0.6的携带p CAMBIA1302农杆菌按照细胞菌液与悬浮细胞的比例为1∶1.2混合侵染30 min后移至共培养基培养10 d,再移至选择培养基进行筛选培养可高效获得转基因阳性的愈伤组织。本研究为进一步优化橡胶草悬浮细胞遗传转化体系奠定了基础。