猪miRNA-101真核表达载体的构建及定点突变

miRNA通过在转录后水平调控靶基因的表达,在机体的生命活动中发挥着重要作用。成熟miRNA 5'端第2~8个核苷酸对其识别、结合靶基因至关重要。笔者的前期研究发现,猪miRNA-101成熟序列5'第5个核苷酸存在着C/A突变。为了研究该突变对miRNA-101功能的影响,试验以pc DNA3.1+为载体骨架,构建了猪miRNA-101基因野生型真核表达载体,并利用重叠延伸PCR法进行定点突变。结果表明:试验成功获得了miRNA-101成熟序列5'端第5个核苷酸突变为A的真核表达载体。