| 草鱼Stefin克隆表达、纯化及活性特征鉴定 |
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| 引用本文： | 陈治光,李冉,李树蕾,杨立彬,蒋然然,钟海霞,陈恩,蒋光阳,李树红. 草鱼Stefin克隆表达、纯化及活性特征鉴定[J]. 南方水产科学, 2016, 0(5): 97-104. DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2016.05.012 |
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| 作者姓名： | 陈治光 李冉 李树蕾 杨立彬 蒋然然 钟海霞 陈恩 蒋光阳 李树红 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学食品学院,四川雅安,625000;2. 吉林大学基础医学院组织学与胚胎学系,吉林长春,130021;3. 吉林大学第一医院儿科,吉林长春,130021 |
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| 基金项目： | 四川省科技支撑计划项目(2014NZ0003)，四川省教育厅自然科学重点基金项目(10ZA052) |
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| 摘 要： | 文章克隆了草鱼(Ctenopharyngodon idellus)Stefin c DNA全长序列,全长294 bp,编码97个氨基酸,无二硫键,N端存在高度保守的Gly(3、4)残基及QXVXG(45~49)序列,比对结果显示其氨基酸序列与Burton's mouthbrooder(Haplochromis burtoni)Stefin A1一致性最高,为47.5%。进化树分析表明草鱼Stefin A与Burton's mouthbrooder(Haplochromis burtoni)、southern platyfish(Xiphophorus maculatus)、Colisa chuna(Trichogaster chuna)、lamprologini(Neolamprologus brichard)、elephant shark(Callorhinchus milii)及bicolor damselfish(Stegastes partitus)Stefin A聚为一类。将构建的原核表达载体Stefin-Pet30a转入E.coli BL21,以1 mol·L-1IPTG诱导表达重组Stefin蛋白,而后经梯度尿素洗涤和镍亲和层析纯化,并分别利用SDS-PAGE和TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱检测诱导及纯化效果,SDS-PAGE结果显示重组Stefin蛋白得到高度纯化,最终呈现相对分子量11.4 k D的单一条带;其在高效液相上保留时间25.98 min处亦呈单一活性峰,纯度为96.28%。以荧光合成肽底物(Z-Phe-Arg-MCA)测活法鉴定重组草鱼Stefin对鲤鱼组织蛋白酶B、L的抑制活性,发现该重组蛋白对二者均体现了明显的抑制活性。
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| 关 键 词： | 草鱼 Stefin 基因克隆 基因表达 纯化鉴定 |
Clone,expression, purification and activity characterization of grass carp (Ctenopharyngodon idellus) Stefin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | grass carp Stefin gene clone gene expression purification and characterization |
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