| NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其Dot-ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 赵 朴,苏红辽,刘兴友,等.NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其Dot-ELISA检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(6):35-40. |
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| 作者姓名： | 赵 朴 苏红辽 刘兴友 等 |
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| 作者单位： | 河南科技学院 动物科学学院；动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心,滑县动物卫生监督所,河南科技学院 动物科学学院；动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 河南省基础与前沿技术项目(122300410135)；河南省教育厅自然科学研究项目(2011A230008) |
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| 摘 要： | 【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-NS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET-32a(+),构建pET32a-NS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDS-PAGE、Western blotting检测和免疫荧光分析,并以纯化的NS1′作为包被抗原初步建立Dot-ELISA检测方法。【结果】PCR扩增获得了长约250bp的H3N2SIV NS1′片段;成功构建了重组载体pET32a-NS1′;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,融合蛋白NS1′大小约34ku,该蛋白可溶,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且用纯化蛋白NS1′制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NS1,建立的Dot-ELISA检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。【结论】实现了H3N2SIV NS1′蛋白的可溶性表达,表达产物具有良好的抗原性,以NS1′作为包被抗原,建立了检测NS1抗体的Dot-ELISA方法。
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 非结构蛋白1 主要抗原区域 可溶性表达 斑点酶联免疫吸附试验 |
| 收稿时间： | 2014/11/11 0:00:00 |
Soluble expression of main antigen region of NS1 gene from H3N2 SIV in Henan and development of Dot-ELISA detection method |
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| ZHAO Pu,SU Hong-liao and LIU Xing-you,et al.Soluble expression of main antigen region of NS1 gene from H3N2 SIV in Henan and development of Dot-ELISA detection method[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(6):35-40. |
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| Authors: | ZHAO Pu SU Hong-liao and LIU Xing-you |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | swine influenza virus nonstructural protein 1 major antigen region soluble expression Dot-ELISA |
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