红豆草ISSR体系优化及其在航天诱变种质鉴定中的应用

采用正交设计法优化适合于红豆草（Onobrychis viciaefolia）的ISSR体系，对影响ISSR PCR的多个因素，包括dNTP、引物浓度、Taq酶浓度、Mg2+浓度进行了4因素3水平的比较、优化，建立了红豆草的ISSR最佳反应体系。运用该体系进行引物及最佳退火温度的筛选，并应用ISSR分子标记技术初步分析红豆草航天搭载诱变效应。结果表明，红豆草ISSR PCR最佳反应体系为：2.5 μL 10×PCR buffer、50 ng模板DNA、dNTP 0.2 mmol/L、Taq DNA 聚合酶1.5 U、引物0.4 μmol/L、Mg2+2.0 mmol/L，总体积为25 μL。试验从53个ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的12个引物，并依次筛选出各引物的退火温度。12个引物标记结果显示共获得多态性位点142个，多态性比率为73.6%。地面对照的多态位点比率(P)、Nei基因多样度(h)和Shannon多样性指数(I)均低于航天诱变种，太空环境能够诱导红豆草发生基因变异。航天诱变可作为红豆草种质资源创新和品种选育的方法之一。

Optimization of ISSR-PCR system and its application in the identification of sainfoin germplasm of space irradiation

Based on the orthogonal design,the optimized ISSR-PCR system of sainfoin(Onobrychis viciaefolia) germplasm was established by comparing the 4 factors(dNTP,Taq polymerase,primer and Mg2+) and the 3 levels.This established system was used to select the primer combination and the optimum Tm and the ISSR Marker System was applied to identify the variation of hereditary substance of sainfoin offspring from space irradiation seeds.The results of this study showed that the optimized ISSR-PCR system for sainfoin wa...