| 溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区cDNA克隆及其原核表达 |
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| 引用本文： | 吕文发,赵静,单雪松,王恒,吴伟. 溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区cDNA克隆及其原核表达[J]. 畜牧兽医学报, 2005, 36(6): 536-539 |
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| 作者姓名： | 吕文发 赵静 单雪松 王恒 吴伟 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118 |
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| 基金项目： | 吉林省自然科学基金项目(20020654) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物，对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，在设计的引物两端分别加上限制性内切酶SacⅠ和XhoⅡ的识别位点序列。利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素α亚基成熟区序列，经PCR扩增出354bp片段，该片段与pMD18-T载体连接，转化JM109感受态细胞，所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定，并进行了测序分析，得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经SacⅠ和XhoⅠ酶切，回收354bp目的片段，定向克隆到pET28a中，转化DH5α受体菌，提取质粒，再转化到BL21(DE3)中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导，通过SDS-PAGE，检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达。
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| 关 键 词： | 抑制素α亚基 cDNA克隆 溆浦鹅 编码区 卵泡 原核表达 RT-PCR技术 SDS-PAGE GenBank 限制性内切酶 阳性克隆 PCR扩增 感受态细胞 PCR鉴定 序列设计 大肠杆菌 总RNA 颗粒细胞 酶切鉴定 测序分析 克隆载体 编码序列 定向克隆 |
| 文章编号： | 0366-6964(2005)06-0536-04 |
| 修稿时间： | 2004-02-10 |
Analysis and Cloning of Goose Inhibin α Subunit Gene |
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| L Wen-fa,ZHAO Jing,SHAN Xue-song,WANG Heng,WU Wei. Analysis and Cloning of Goose Inhibin α Subunit Gene[J]. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences, 2005, 36(6): 536-539 |
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| Authors: | L Wen-fa ZHAO Jing SHAN Xue-song WANG Heng WU Wei |
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| Affiliation: | L(U) Wen-fa,ZHAO Jing,SHAN Xue-song,WANG Heng,WU Wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Inhibin RT-PCR clone prokaryotic expression |
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