新生山羊肾小管上皮细胞的原代培养与鉴定

【目的】建立新生山羊肾小管上皮细胞(Renal tubular epithelial cell，RTECs)的分离培养方法。【方法】采集刚出生未哺乳健康山羊的肾脏，分别采用胶原酶Ⅰ和胶原酶Ⅳ消化法分离培养RTECs，选择孔径0.15 mm的筛网对RTECs进行纯化，观察各组RTECs的生长情况；对分离的RTECs进行免疫组化和碱性磷酸酶染色鉴定，并进行透射电镜观察；用流式细胞仪检测RTECs的增殖周期和凋亡情况。【结果】胶原酶Ⅳ对RTECs的消化效果优于胶原酶Ⅰ，所得的细胞团块多，纯度高，细胞生长快，经孔径0.15 mm的筛网过滤后，RTECs的纯度达95%以上，并可连续传至第12代。分离获得的细胞经免疫组化法和碱性磷酸酶染色法鉴定呈阳性；透射电镜观察显示，细胞表面有微绒毛和桥粒连接。用流式细胞仪检测的结果显示，第4代新生山羊RTECs中G1期和S期细胞分别占细胞总数的25.01%和74.99%，G2/G1为1.97%，第10代细胞中G1期细胞和S期细胞均占50.00%，G2/G1为1.88%；第4代细胞的早期凋亡率在0.32%左右，而第10代可达3.7%，远高于第4代细胞。【结论】建立了增殖快、细胞活力高的山羊RTECs分离培养方法。

Culture and identification of renal tubular epithelial cells of newborn goat