表达KsdD重组大肠杆菌的构建及转化工艺优化 |
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作者姓名: | 汤睿 申雁冰 耿宇菡 赵云秋 王敏 |
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作者单位: | 工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业发酵微生物教育部重点实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457 |
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基金项目: | 天津市自然科学基金项目 |
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摘 要: | 3-甾酮-△1-脱氢酶(KsdD)是催化甾体化合物C1,2位脱氢反应的关键酶,在甾体药物的生产中起着重要作用。本研究首先通过对红球菌、分枝杆菌及简单节杆菌来源的KsdD蛋白进行氨基酸序列分析,并进一步通过酶活比较及底物催化能力的验证,最终筛选获得具有较高C1,2位脱氢活力的脱氢酶KsdDR2。研究了过表达KsdDR2蛋白重组大肠杆菌的转化条件对底物雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)转化的影响,结果表明,在30℃转化条件下,当AD:羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的摩尔比为1:1.5时,可使底物AD的转化率达99%以上。本研究为利用工程菌株高效生产C1,2位脱氢甾体化合物的研究奠定了理论基础。
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关 键 词: | 3-甾酮-△1-脱氢酶 大肠杆菌 微生物转化 雄甾-4-烯-3 17-二酮 |
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