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| 山羊地方性鼻内肿瘤病毒SC株gag基因分子克隆与原核表达 | |
| 作者姓名： | 何桦 冯迎春 颜其贵 张国俊 张霞 |
| 作者单位： | 1. 四川农业大学动物遗传育种研究所,四川雅安625014; 2. 四川农业大学动物生物技术中心,四川雅安,625014 3. 四川农业大学动物生物技术中心,四川雅安625014;四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川雅安625014 4. 四川南江黄羊科学研究所,四川南江635600; 5. 四川崇州市农村发展局,四川成都,611230 |
| 基金项目： | 教育部长江学者和创新团队发展计划 |
| 摘 要： | 克隆山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV)的群抗原基因gag,并通过原核表达系统对gag进行表达研究。参照GenBank中收录的山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)gag基因序列设计1对特异引物,以地方性鼻内腺癌(ENA)山羊鼻内分泌物中病毒RNA为模板,RT-PCR扩增获得目的片段,并将产物连接到pMD18-T载体获得阳性克隆(pMD18-gag)并测序。根据gag基因的ORF设计1对表达用引物进行亚克隆,并将ORF重组到pET-32,重组质粒转化至宿主菌Rostta中,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE分析,纯化表达产物,通过ELISA初步分析产物的反应原性。结果显示:克隆获得长2 249 bp的核酸序列(GenBank:HM104174),含有完整的ORF,与已报道的ENTV-2 gag基因的同源性高达87%,氨基酸水平上的同源性高达96.4%。表达产物大小约87 ku,与理论推理一致。采用ELISA方法检测表达产物未能与ENA阳性血清发生特异性反应。结果表明:gag基因在原核系统pET-32/Rostta中得到表达,表达产物与ENA阳性血清不具反应原性。 |
| 关 键 词： | 山羊 ENTV gag基因 原核表达 |
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