奶牛孕酮单克隆抗体的制备及鉴定

奶牛妊娠的早期诊断,对奶牛生产具有重要意义,对于未妊娠母牛失误诊断,会错失下一个情期配种任务的安排,造成产犊间隔延长、繁殖率降低等问题。对早期妊娠的检测有多种方法,临床上通常把血、奶中孕酮的含量作为判断反刍动物怀孕与否的可靠依据。以甾体类激素孕酮为研究对象,利用琥珀酸酐法将11α-羟孕酮活化,运用碳二亚胺法选择BSA为免疫抗原载体,OVA为检测抗原载体与孕酮进行偶联反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明偶联成功。P-BSA乳化后皮下免疫小鼠,3次免疫后血液效价最大达到1∶(243#10~3)。通过淋巴细胞杂交瘤技术获得针对孕酮的3株单克隆抗体细胞株2H3、2C3、C3H11。3株单抗诱生的腹水经纯化柱纯化,均未与雌二醇发生反应,特异性较好,为尽早检测出未妊娠牛,以适时治疗不孕牛、尽早淘汰劣质牛提供简便迅速的方法。