| 尼罗罗非鱼肝cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 何学军,李思发. 尼罗罗非鱼肝cDNA文库的构建[J]. 上海水产大学学报, 2005, 14(4): 353-358 |
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| 作者姓名： | 何学军 李思发 |
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| 作者单位： | 上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室 上海200090 |
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| 基金项目： | 国家“十五”科技攻关子项目尼罗罗非鱼选育(2001BA505B0513) |
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| 摘 要： | 用Stratagene技术构建了吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)肝cDNA文库。首先用TRIZOL法提取肝总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测,表明总RNA纯度高且完整性良好。然后分离纯化mRNA,合成双链cDNA之后,加EcoRⅠ接头、EcoRⅠ末端磷酸化、XhoⅠ消化,并用葡聚糖凝胶柱层析分级收集cDNA样品,得到300 mg cDNA,符合建库要求。双链cDNA与Uni-ZAP XR Vector连接后,用GigapackⅢGold Packaging Extract进行体外包装得到cDNA文库。测得的文库滴度为1.25×107pfu/mL,文库噬菌体的滴度符合文库保存和筛选实验的要求。随机挑选20个阳性单克隆噬菌斑进行PCR鉴定后,得出文库的重组率达100%,扩增出的片段主要集中在0.5~2 kb之间,平均插入片段长度约为1.05 kb,结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高。取扩增文库80μL进行体外切割,约含3.6×106个重组子,切割后phagemid量为2.0×106,切割效率为79.4%。经抽提质粒获得质粒DNA约1.2 mg。
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| 关 键 词： | 尼罗罗非鱼 肝 cDNA文库 |
| 文章编号： | 1004-7271（2005）04-0353-06 |
| 收稿时间： | 2005-05-15 |
| 修稿时间： | 2005-05-15 |
Construction of cDNA library from liver of Nile tilapia Oreochromis niloticus |
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| HE Xue-jun,LI Si-fa. Construction of cDNA library from liver of Nile tilapia Oreochromis niloticus[J]. Journal of Shanghai Fisheries University, 2005, 14(4): 353-358 |
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| Authors: | HE Xue-jun LI Si-fa |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Oreochromis niloticus liver cNDA library |
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