| 龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 帅良,李静,韩冬梅,吴振先. 龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达[J]. 华南农业大学学报, 2015, 36(3): 91-97 |
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| 作者姓名： | 帅良 李静 韩冬梅 吴振先 |
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| 作者单位： | 1. 华南农业大学园艺学院,广东广州,510642
2. 广东省农业科学院果树研究所,广东广州,510640 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系（荔枝龙眼）资助（CARS-33-14） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长c DNA序列,构建p ET-32a-Dl HXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的c DNA全长序列,命名为Dl HXK,登录号为KF776906.1.龙眼Dl HXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82%;荧光定量表达分析表明,Dl HXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDSPAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.
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| 关 键 词： | 龙眼 己糖激酶 基因克隆 荧光定量PCR 原核表达 |
| 收稿时间： | 2014-03-10 |
Cloning and prokaryotic expression of hexokinase gene from Dimocarpus longan |
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| SHUAI Liang,LI Jing,HAN Dongmei and WU Zhenxian. Cloning and prokaryotic expression of hexokinase gene from Dimocarpus longan[J]. JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY, 2015, 36(3): 91-97 |
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| Authors: | SHUAI Liang LI Jing HAN Dongmei WU Zhenxian |
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| Affiliation: | 1 College of Horticulture, South China Agricultural University,,1 College of Horticulture, South China Agricultural University,,2 Institute of Fruit Tree Research, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, and 1 College of Horticulture, South China Agricultural University, |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dimocarpus longan hexokinase gene cloning quantitative RT-PCR prokaryotic expression |
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