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龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达
引用本文:帅良,李静,韩冬梅,吴振先. 龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达[J]. 华南农业大学学报, 2015, 36(3): 91-97
作者姓名:帅良  李静  韩冬梅  吴振先
作者单位:1. 华南农业大学园艺学院,广东广州,510642
2. 广东省农业科学院果树研究所,广东广州,510640
基金项目:国家现代农业产业技术体系(荔枝龙眼)资助(CARS-33-14)
摘    要:【目的】克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长c DNA序列,构建p ET-32a-Dl HXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的c DNA全长序列,命名为Dl HXK,登录号为KF776906.1.龙眼Dl HXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82%;荧光定量表达分析表明,Dl HXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDSPAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.

关 键 词:龙眼  己糖激酶  基因克隆  荧光定量PCR  原核表达
收稿时间:2014-03-10

Cloning and prokaryotic expression of hexokinase gene from Dimocarpus longan
SHUAI Liang,LI Jing,HAN Dongmei and WU Zhenxian. Cloning and prokaryotic expression of hexokinase gene from Dimocarpus longan[J]. JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY, 2015, 36(3): 91-97
Authors:SHUAI Liang  LI Jing  HAN Dongmei  WU Zhenxian
Affiliation:1 College of Horticulture, South China Agricultural University,,1 College of Horticulture, South China Agricultural University,,2 Institute of Fruit Tree Research, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, and 1 College of Horticulture, South China Agricultural University,
Abstract:
Keywords:Dimocarpus longan   hexokinase   gene cloning   quantitative RT-PCR   prokaryotic expression
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