| 北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达 |
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| 引用本文： | 江勇,蔡辉益,刘国华,李勇,张姝,常文环,郑爱娟.北京油鸡肠道肽转运蛋白PEPT1表达载体的构建及在293-T细胞的表达[J].东北农业大学学报,2008,39(5):71-76. |
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| 作者姓名： | 江勇 蔡辉益 刘国华 李勇 张姝 常文环 郑爱娟 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院饲料研究所,北京,100081 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 本试验通过分子生物学手段建立了北京油鸡PEPT1细胞模型。根据GenBank的原鸡PEPT1保守区序列设计引物,从北京油鸡肠道粘膜组织中扩增出PEPT1基因,将其与pGEM-T载体连接并测定核苷酸序列,成功获得到测序正确的2145bp的基因,并将北京油鸡肠肽转运载体PEPT1基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0,构建了真核表达载体pcDNA3-PEPT1。采用脂质体介导将表达质粒pcDNA3-PEPT1转染293-T细胞,同时转染pcDNA3.0-EGFP荧光蛋白进行转染体系荧光监测,流式细胞术检测转录后16、20、24h的荧光强度。分别在16、20、24、44h收集等量转染细胞,抽提转染细胞总RNA,DNAseⅠ处理残留的DNA污染,反转录合成cDNA,以构建不同稀释度的pGEM-T-PEPT1质粒为模板,建立SYBERGREEN实时荧光定量标准曲线,检测PEPT1在293-T细胞中的转录水平。结果表明,在质粒转染入293-T细胞后,在16、20、24、44h均有稳定的转录水平。从而建立了在293-T细胞表达北京油鸡PEPT1的外源模型,同时为研究该转运蛋白性质,进一步调控动物肠道肽的吸收奠定了基础。
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| 关 键 词： | 北京油鸡 克隆 表达 293-T细胞 模型 |
Cloning and constructing recombinant Beijing-you chicken PEPT1 in 293-T cell |
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| JIANG Yong,CAI Huiyi,LIU Guohua,LI Yong,ZHANG Shu,CHANG Wenhuan,ZHENG Aijuan.Cloning and constructing recombinant Beijing-you chicken PEPT1 in 293-T cell[J].Journal of Northeast Agricultural University,2008,39(5):71-76. |
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| Authors: | JIANG Yong CAI Huiyi LIU Guohua LI Yong ZHANG Shu CHANG Wenhuan ZHENG Aijuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Beijing-you chicken clone expression 293-T cell model |
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