犬弓首蛔虫C型凝集素4的原核表达及组织定位

旨在探讨犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)C型凝集素4(C-type lectin 4,C-TL-4)的基因特征,并对其组织分布进行研究。根据Tc-ctl-4的基因组数据(GenBank:AF126830.1),以T.canis为模板对Tc-ctl-4全长基因进行扩增,并进行序列分析和多重序列比对;构建Tc-ctl-4/pCold TF原核表达载体,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体;同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光组化检测Tc-ctl-4基因的转录水平和Tc-CTL-4的组织分布。结果显示,Tc-ctl-4基因的全长序列为842 bp,共编码280个氨基酸,多重序列比对显示,犬弓首蛔虫和猫弓首蛔虫的C型凝集素均含有高度保守的CTLD结构域;SDS-PAGE检测发现重组蛋白Tc-CTL-4的大小约为86 ku,以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以500 mmol·L^-1咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制...