| 摘 要： | 本实验旨在探究牛卵泡颗粒细胞（Granulosa Cells,GCs）bta-miR-2285bc与BMPR2的靶标关系,及其作为BMP15下游关键因子对GCs增殖和卵泡发育的潜在调控作用。利用miRanda预测bta-miR-2285bc与BMPR2 3’UTR的结合位点,构建BMPR2 3’UTR野生型与突变型双荧光报告载体,并通过双荧光素酶报告试验验证其靶标关系;屠宰场获取牛卵巢并于实验室分离直径4～8 mm卵泡,刮取卵泡壁GCs进行体外培养。设置浓度梯度,根据BMPR2表达量确定BMP15最适添加浓度。转染bta-miR-2285bc mimics/inhibitor至GCs并添加BMP15,qRT-PCR和Western blotting分别检测BMPR2 mRNA和蛋白表达,随后qRT-PCR检测GCs BMP/Smad信号通路、增殖、凋亡和类固醇激素合成相关基因表达水平,Elisa检测细胞培养液中雌激素（E2）和孕激素（P4）浓度。结果显示：bta-miR-2285bc能够靶向结合BMPR2 3’UTR;向体外培养的GCs添加最适浓度BMP15(100ng/mL)并转染b...
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