1,25(OH)2D3及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)₂D₃是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊，分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞，用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^-1 1,25(OH)₂D₃处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染，同时设置阴性对照组和空白对照组，每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)₂D₃处理以及VDR基因敲除后，分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达，用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明，1,25(OH)₂D₃能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD109tr1、gBD109tr2、gBD113...