奶牛生物钟基因BMAL1真核表达载体的构建及生物信息学分析 |
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作者姓名: | 徐皓东 王逸群 刘祖培 李丹 张海森 李雅婷 江海圳 靳亚平 陈华涛 |
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作者单位: | 1. 西北农林科技大学动物医学院;2. 西北农林科技大学农业农村部动物生物技术重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(31771301);;中国博士后科学基金第11批特别资助(2018T111112); |
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摘 要: | 本研究旨在克隆奶牛脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1基因(Brain and Muscle Arnt-Like Protein 1,BMAL1)的蛋白编码序列(Coding Sequence,CDS)并构建其真核表达载体,运用生物信息学方法解析其CDS序列和编码蛋白特性。以牛肝脏组织为材料,利用PCR技术扩增奶牛BMAL1基因中带有同源臂的CDS片段。采用同源重组法,将目的片段连接至酶切线性化的pc DNA3.1-Puro-N-3HA真核表达载体上,酶切及测序结果均符合预期的质粒命名为pc DNA3.1-3HA-c BMAL1。将空载与重组质粒分别转染至HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR技术(q PCR)和Western Blotting技术检验奶牛BMAL1基因的过表达效果,并利用生物信息学软件分析BMAL1基因CDS区及其编码蛋白的特性和功能。结果显示,pc DNA3.1-3HA-c BMAL1真核表达载体构建成功,将该质粒转染至HEK293T细胞后,成功实现了BMAL1在m RNA和蛋白水平的过表达;牛BAML1基因与绵羊、山羊同源性最高,BMAL1蛋白为不稳定蛋白,其上不存在...
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关 键 词: | 奶牛 BMAL1 生物钟 载体构建 生物信息学 |
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