毒害艾美耳球虫和产气荚膜梭菌双重PCR检测方法的建立

旨在初步建立可同时检测毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的双重PCR及纳米PCR检测方法。基于E.necatrix的ITS-2基因和C.perfringens的α毒素基因分别设计、筛选靶基因位点的特异性扩增引物，通过反应体系和退火温度的优化，建立适用于两种病原的特异性双重PCR和双重纳米PCR检测方法；用所建立的方法对6种其它常见寄生性原虫和3种其他细菌进行PCR扩增以验证其特异性；构建两种病原的重组质粒pMD19-T-ITS2和pMD19-T-cpa,将其按10倍倍比稀释成不同浓度梯度的质粒模板用于所建方法的敏感性试验。结果表明：两种方法均能特异性扩增出E.necatrix约150 bp和C.perfringens约400 bp的目的片段，且所建立的两种检测方法对其他6种其他原虫和3种其他细菌的检测结果均为阴性；双重PCR扩增E.necatrix和C.perfringens的最低模板检出量分别是181和1 050 copies,而双重纳米PCR的最低模板检出量分别是1.81和105 copies;临床检测...