河南华溪蟹2种C型凝集素原核表达及多克隆抗体的制备

C型凝集素是一类模式识别受体蛋白,在先天性免疫中发挥重要作用。为了深入探明河南华溪蟹(Sinopotamon honanense)2种C型凝集Sh Lec21和Sh Lec23在先天性免疫中的作用,研究将Sh Lec21和Sh Lec23基因部分编码区序列连接至p GEX-4T-1,构建了重组表达载体p GEX-4T-1-Sh Lec21与p GEX-4T-1-Sh Lec23。随后将重组表达载体转至BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导,表达重组Sh Lec21-GST与Sh Lec23-GST融合蛋白并纯化。再以纯化蛋白作为抗原免疫日本大耳兔,第4次免疫后分离抗血清,并采用ELISA法检测抗体效价。结果显示,在28℃,0.2 mmol/L IPTG,诱导10 h条件下,可获得Sh Lec21-GST和Sh Lec23-GST重组融合蛋白以包涵体形式高效表达;制备的兔抗河南华溪蟹Sh Lec21-GST与Sh Lec23-GST多克隆抗体效价均在1∶100 000以上。研究成功对河南华溪蟹Sh Lec21与Sh Lec23进行了原核表达,首次制备了高效价的抗河南华溪蟹Sh Lec21与Sh Lec23多克隆抗体,为后续研究Sh Lec21与Sh Lec23基因在河南华溪蟹先天性免疫中的作用提供了有力的工具。