氨肽酶N鼠源单链抗体T7噬菌体展示文库的构建 |
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引用本文: | Sun D,刘丹.氨肽酶N鼠源单链抗体T7噬菌体展示文库的构建[J].中国畜牧兽医,2012(10):222. |
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作者姓名: | Sun D 刘丹 |
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摘 要: | 氨肽酶N(pAPN)是一种常见的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的细胞受体。为研究抗pAPN的单链抗体(scFv),试验设计一系列简并引物,通过RT-PCR方法从免疫了天然pAPN的BALB/c小鼠脾中克隆了免疫球蛋白轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的编码基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)用12个氨基酸的连接肽将VL和VH的扩增产物随机连接,从而获得单链抗体基因。将整个单链抗体基因与T7Select10-3b载体连接,通过体外包装获得了针对pAPN的鼠源ScFv噬菌体文库。pAPN单链抗体初级文库包含2.0×107个重组噬菌体克隆,扩增后的文库滴度达到3.6×109 PFU/mL。Bst NⅠ酶切分析和DNA测序结果显示,28个pAPN抗体初级文库的噬菌体克隆多样性良好。以pAPN C亚基重组蛋白为包被抗原,用噬菌体ELISA进一步验证抗pAPN单链抗体库的活性。本研究主要介绍了采用T7噬菌体展示系统构建猪冠状病毒TGEV和PEDV通用受体pAPN的鼠源单链抗体库及其鉴定。
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关 键 词: | pAPN 抗体 噬菌体抗体库 TGEV PEDV |
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