| 鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定 |
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| 作者姓名： | 师润 杨霞 陈陆 余秋颖 王川庆 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号:30972187);教育部高等学校博士学科点专项(编号:2011410511003) |
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| 摘 要： | 为了探讨鸡肠上皮原代细胞分离培养方法,进一步研究人源志贺菌对鸡的致病性和为相关侵袭特性提供体外模型,分别取不同日龄鸡胚,用0.1 g/mLⅠ型中性蛋白酶和300 U/mLⅪ型胶原酶联合分离纯化鸡肠上皮原代细胞,筛选其最佳培养方法,并对培养细胞进行鉴定；然后采用0.125％胰酶和0.01％ EDTA联合消化进行鸡肠上皮原代细胞传代.结果显示,应用Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶消化15日龄鸡胚肠组织可获得满意的肠上皮细胞分离效果,细胞贴壁性良好.培养出圆形或多角形单层生长呈“铺路石样”的细胞,培养的细胞在12 h内贴壁,24 ～48 h明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,生长状况不良.经透射电镜观察鉴定为肠上皮细胞.且传代后细胞贴壁生长良好.建立的鸡肠上皮原代细胞分离培养方法可获得纯度较高的鸡肠上皮原代细胞,制备的细胞可以连续传代3次.
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| 关 键 词： | 鸡肠上皮原代细胞 体外培养 鉴定 传代 |
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