| 黑曲霉植酸酶基因phyA的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 闻雅男,王学英,夏润玺,王媛媛.黑曲霉植酸酶基因phyA的克隆及在大肠杆菌中的表达[J].沈阳农业大学学报,2009,40(3). |
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| 作者姓名： | 闻雅男 王学英 夏润玺 王媛媛 |
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| 作者单位： | 沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳,110161 |
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| 摘 要： | 为获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生物生物制剂,从自行筛选的黑曲霉中提取RNA.通过反转录合成模板cDNA,根据pyhA成熟肽编码序列设计出一对引物,PCR扩增phrA,对扩增片段进行了克隆,通过限制性内切酶酶切分析、DNA测序证明phyA基因克隆成功.从pBS-T-phyA克隆中获取phya编码序列,将其与pET28a+质粒连接,构建pET28a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.本研究成功克隆phyA,该基因全长1404bp,以ATG为起始密码子,TGA为终止密码子,编码467个氨基酸组成的多肽.SDS-PAGE电泳结果表明,phyA在大肠杆菌中成功表达,成熟植酸酶的分子量约为51kDa.在0.4g·L-1的IPTG的诱导下,植酸酶活性最大(1174U).
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| 关 键 词： | 黑曲霉 phyA基因 大肠杆菌 克隆载体 高效表达 |
Cloning of a phyA from Aspergullus niger and Its over Expression in Escherichia coli |
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| WEN Ya-nan,WANG Xue-ying,XIA Run-xi,WANG Yuan-yuan.Cloning of a phyA from Aspergullus niger and Its over Expression in Escherichia coli[J].Journal of Shenyang Agricultural University,2009,40(3). |
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| Authors: | WEN Ya-nan WANG Xue-ying XIA Run-xi WANG Yuan-yuan |
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