猪肺炎支原体P102基因的突变

猪肺炎支原体是引起猪地方性喘气病的病原。人们预测猪肺炎支原体p102基因是猪肺炎支原体潜在的黏附因子。在p102基因中有七个密码子TGA，在猪支原体中编码色氨酸，而在原核和真核细胞中TGA为终止密码子。因此，为了将p102基因在原核与真核系统中表达，需将TGA突变成TGG。从猪肺炎支原体Yin-1株扩增p102基因（全长2700bp），将其分为A（1bp-936bp）、B（937bp-1665bp）、C（1666bp-2700bp）-S-段分别克隆进pMD-18T载体上，通过定点PCR方法把A段四个和C两段三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG，每突变成功一个密码子后都要连接到pMD-18T载体上送测序。最后将突变成功三段基因按A＋B＋C的顺序相连亚克隆到pMD-18T载体上，得到质粒pMD-18T—P102。测序结果用MegAlign软件与国际标准菌株232进行比较，P102基因中七个TGA已经成功突变成TGG。P102基因定点突变的成功为其在原核和真核系统中的表达奠定了良好的基础，亦对猪肺炎支原体疫苗研制具有重要意义。