桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达 |
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引用本文: | 李健,王鑫,胡志强,亢学平,杜忠伟,王旭,陈艳秋.桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达[J].食用菌学报,2018(2). |
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作者姓名: | 李健 王鑫 胡志强 亢学平 杜忠伟 王旭 陈艳秋 |
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作者单位: | 延边朝鲜族自治州农业科学院 |
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摘 要: | 根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在,重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原,采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定抗血清效价,4免之后,4只小鼠抗血清效价均大于121500,成功制备了IO-AP多克隆抗体。Western Blotting检测表明,IO-AP在桦褐孔菌菌核形成过程中的表达呈现先上升后下降的趋势,以第二个时期(栽培130d,菌核长至1.33g时)AP蛋白表达量最高。
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