| 增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP在大肠杆菌中的表达与纯化 |
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| 引用本文： | 牛传双 方六荣 肖少波 张辉 陈焕春. 增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP在大肠杆菌中的表达与纯化[J]. 华中农业大学学报, 2004, 23(5): 489-491 |
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| 作者姓名： | 牛传双 方六荣 肖少波 张辉 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070;华中农业大学动物医学院动物病毒室,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 (3 9970 5 5 9)资助 |
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| 摘 要： | 增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP／V163A／S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白。为了获得大量高纯度的蛋白，将mUT4EGFP基因插入原核表达载体pTWINl中，使之与几丁质结合域(CBD)-内含肽(intein)融合，获得原核表达质粒pTWIN-M4。将pTWIN-M4转化大肠杆菌BL21(DE3)plyss，IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析，结果显示，CBD-intein-mut4EGFP融合蛋白在BL21(DE3)plysS中获得高效表达并以可溶性蛋白的形式存在。进一步采用几丁质柱纯化系统对表达产物进行纯化，得到了高纯度的mut4EGFP．
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| 关 键 词： | 绿荧光蛋白 突变体mut4EGFP 表达 纯化 |
The Expression and Purification of Enhanced Green Fluorescent Protein mutant mut4EGFP in E.coli |
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| Niu Chuanshuang Fang Liurong Xiao Shaobo Zhang Hui Chen Huanchun. The Expression and Purification of Enhanced Green Fluorescent Protein mutant mut4EGFP in E.coli[J]. Journal of Huazhong Agricultural University, 2004, 23(5): 489-491 |
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| Authors: | Niu Chuanshuang Fang Liurong Xiao Shaobo Zhang Hui Chen Huanchun |
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| Abstract: | mut4EGFP, a novel enhanced green fluorescent protei nmutant (EGFP/V163A/S175G), is more bright and stable than EGFP. In orde r to obtain the purified protein, the DNA fragment encoding mut4EGFP was inserte d into prokaryotic expression vector pTWIN1, resulting in the expression plasmid pTWIN-M4. pTWIN-M4 was further transformed into BL21(DE3)plysS, induced by IP TG and expression was analyzed using SDS-PAGE. The results showed that mut4EGF P was expressed and existed in soluble form. The expressed products were further purified using Chitin Beadsand mg-grade recombinant proteins were obta ined. |
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| Keywords: | green fluorescent protein mut4EGFP e xpression purification |
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